Varios métodos han sido ideados para la recolección de semen en los animales domésticos, pero la mayoría de ellos han sido rechazados a favor del uso de la vagina artificial. Todos los centros de inseminación artificial coinciden en afirmar que esta es la metodología más sencilla, sobre todo en animales de gran talla. Sin embargo, existen otras alternativas que también se mencionarán a continuación.

1.RECOLECCIÓN VAGINAL

Éste es uno de los métodos más antiguos de recolección de semen utilizado en animales. Consiste en la extracción del semen desde el interior de la vagina luego de un servicio natural y utilizando como ayuda espátulas, cucharas, jeringas, pipetas, etc. Es útil sólo como método para evaluar una muestra de semen, pero de ninguna manera sirve en el procesamiento del semen a gran escala para la inseminación artificial. Sólo una pequeña proporción del eyaculado es recuperada y se encuentra mezclada con secreciones vaginales, que como es sabido, son desfavorables para la supervivencia de los espermatozoides.

2. COLECTORES PENEANOS O VAGINALES

Diversos métodos han sido utilizados, pero siempre con la idea de obtener un eyaculado de tipo fisiológico a través de un coito natural. Los colectores son una especie de guantes o condones de distintos materiales, que no han dado resultado en la recolección de semen bovino, aunque sí ha sido de relativa utilidad en algunas yeguas. La causa del rechazo a esta técnica reside en que la hembra nota un cuerpo extraño en su vagina por lo que permanece inquieta, y el macho se torna reacio a la penetración.

3. MÉTODO DE LA ESPONJA

Mediante esta técnica se colocaban esponjas en el fondo de la vagina y posteriormente a la cópula se retiraban y comprimían para exprimir el semen absorbido. Como es de esperarse, no ha dado resultados satisfactorios.

4. MANIPULACIÓN MECÁNICA

Otro método de colección de semen en los animales es por masaje rectal. Aquellos reproductores que han tenido un adecuado descanso sexual, son dóciles y se manejan con calma, son buenos candidatos para esta técnica. También se recomienda en animales que posean lesiones dolorosas en cuartos posteriores. Sin embargo, posee varias desventajas y quizás no sea práctica en todas las situaciones. Algunas de las desventajas incluyen irritación de la mucosa rectal, falta de protrusión del pene que resulta en muestras contaminadas desde el prepucio, la necesidad de una segunda persona para la colección de la muestra y la dificultad de estimular machos excitados o de mal carácter.

Otro inconveniente es el número limitado de animales a los que se puede someter a esta técnica en un tiempo determinado, dado que el procedimiento es agotador para el personal que realiza el masaje. Además, si no se pudo recolectar el semen dentro de los primeros 2 o 3 minutos es poco probable que el procedimiento sea exitoso.

5. MÉTODO DE LA ELECTROEYACULACIÓN

Esta técnica permite extraer semen a los animales sin previo acostumbramiento. Esto es de suma importancia para la evaluación de reproductores a campo, donde la colección de semen se puede realizar en la manga en el mismo momento del examen clínico. Además, es muy utilizada cuando se trabaja con animales no domésticos, sino de vida silvestre o de zoológicos.

Fue utilizada primeramente por Gunn (1936) en Australia. Está basada en la aplicación rítmica de un estímulo eléctrico por vía transrrectal estimulando el sistema nervioso autónomo y somático, que conduce a la obtención de secreciones de las glándulas accesorias y finalmente a la eyaculación.

Existen diferencias en cuanto al modo de operar y en cómo los animales responden a distintos tipos de electroeyaculadores. La elección de éstos es una cuestión de preferencia personal.

El uso de la electroeyaculación está indicado en las siguientes situaciones:

a)Eyaculado para diagnóstico (espermiograma, cultivo bacteriológico, reacciones inmunológicas, piospermia, etc.)

b)Procesamiento de semen para inseminación artificial

c)Inspección clínica del pene por producir protrusión del mismo

d)Animales indóciles o de baja líbido

e)Animales con algún tipo de impotencia pero fértiles (por ejemplo enfermedades en los miembros o columna que les impidan la monta natural)

Equipos necesarios

El equipo utilizado varía según la fuente de energía y según el tipo y disposición de los electrodos en el vástago o sonda.

A.Según la fuente de energía

a.Red eléctrica de línea: este tipo de aparato no es de mucha utilidad por la posibilidad de que no haya electricidad cerca de la manga. Este equipo utiliza un transformador disminuyendo el voltaje a 0 – 30 V y a una intensidad de 160 miliamperes

b.Baterías o pilas: estos equipos funcionan con baterías de 6 V o 12 V y 90 – 140 amperes. Con el auge de los circuitos transitorizados, se han desarrollado equipamientos a pilas de 1,5 V. Ambos requieren de un transformador de corriente continua a alterna.

c.Equipos manuales: se basan en la utilización de un dínamo de 6 V y 3 W (del tipo de la que genera luz en una bicicleta), unido a una máquina de afilar manual y a un soporte que permite fijarlo a una madera en la manga. La piedra esmeril es sustituida por una rueda de goma de 15 cm de diámetro. Este sistema entrega corriente alterna y permite utilizar electrodos digitales de cobre o un vástago portaelectrodos. La ventaja que poseen estos equipos es que cualquier persona hábil en herrería puede fabricarlo, disminuyendo los costos.

B.Según el tipo y disposición de los electrodos

a.Vástago portaelectrodos: el cuerpo de la sonda puede medir aproximadamente 40 cm de largo por 5,6 cm de diámetro. Los electrodos pueden estar dispuestos en forma anular o semianular y también de manera longitudinal. Además pueden variar en número. Las terminales modernas poseen tres electrodos separados 1 cm entre sí y ubicados ventralmente. Usualmente las viejas terminales de cuatro electrodos producen estímulos desparejos en las piernas del animal, provocando que éste pierda el equilibrio. Esto no ocurre con las terminales de tres electrodos ventrales.

b.Electrodos digitales: éstos pueden ser anillos de cobre soldados a los cables del equipo que se colocan en los dedos pulgar y medio o índice y anular de la mano enfundad en un guante de goma. Existen también espirales de cobre y un electrodo navicular con 6 electrodos de 0,5 cm de ancho. Las terminales rectales de un buen diámetro producen una respuesta mayor que las de tamaño pequeño a un mismo estímulo eléctrico. Para la mayoría de los animales de talla grande, que pesan entre 550 y 900 kg, una terminal de 6,5 a 7,5 cm de diámetro parece ideal. En animales de mayor tamaño y más viejos, una terminal de 9 cm incrementa la posibilidad de obtener un adecuado estímulo para la erección y eyaculación. La ventaja de los electrodos digitales se basa en la posibilidad de aplicación independientemente del tamaño del animal, en una mayor precisión de colocación a ambos lados de la uretra pelviana y en la factibilidad de realizar suaves masajes mientras se aplica el estímulo eléctrico. Sin embargo, se debe considerar que es muy cansador cuando es necesario realizar la electroeyaculación a un gran número de animales en un mismo día.

Recientemente se han desarrollado nuevas terminales con dos electrodos ventrales y, a su vez, cada uno de ellos está dividido en tres segmentos que pueden activarse separadamente. El segmento más caudal es utilizado para producir la erección y protrusión en todos los animales y la eyaculación en los jóvenes. En animales adultos el segmento medial y ocasionalmente el craneal son los más utilizados en la estimulación de la eyaculación.

Metodología

Para la extracción de semen por electroeyaculador se recomienda tener una manga de 76 cm de ancho que puede albergar a la mayoría de los animales grandes. Se debe colocar detrás del individuo un poste fuerte a una altura ideal entre 71 y 76 cm y otro a 30 cm del suelo como corrector durante el procedimiento, dado que es posible que los animales pierdan el equilibrio. Si es posible los animales deben estar parados libremente y la manga debe tener un buen piso. Los animales que son agarrados de la cabeza con el cepo comúnmente se arrodillan y luego durante la electroeyaculación se echan, y en estos casos un cinturón por debajo del tórax puede ser de utilidad.

Es muy importante destacar que la cantidad de estimulación debe ser estimada a través de las respuestas del animal y no prestando atención al voltaje del equipo. La primera estimulación debe ser pequeña hasta que el macho demuestre una mínima respuesta. Las estimulaciones sucesivas deben ir siendo incrementadas de a poco, con una duración de uno o dos segundos y luego discontinuarse por medio segundo antes de comenzar con la siguiente estimulación. El fluido preseminal no debe recolectarse porque diluye el eyaculado y puede originar falsos resultados. Cuando éste comienza a tornarse más opaco y espeso comienza la colección en el cono o tubo de examinación colocado directamente en el pene. Si el animal no protruye el pene, el ayudante debe presionar sobre la flexura sigmoidea detrás del escroto y el operador debe estar listo con una gasa para tomarlo apenas protruya.

Aunque la estimulación se continúa hasta la obtención de 2 a 5 ml de semen, la cantidad de éste no tiene mucho que ver con la calidad. La mayoría de los animales eyaculan sin mucha estimulación, sin embargo, si se ha alcanzado el máximo de estímulos sin obtener la eyaculación se deben dar 4 o 5 estímulos máximos seguidos de uno o dos minutos de descanso. El pene debe ser agarrado con una gasa y mantenido durante el período de descanso, dado que si lo dejamos libre luego no protuirá para la segunda colección. El operador debe estar atento porque a menudo el semen es emitido cuando el individuo se relaja en el período de descanso. Un tiempo similar de relajación se les debe dar a los machos que eyaculan fácilmente cuando se desea otra muestra. Frecuentemente, la segunda muestra es mucho más concentrada que la anterior.

Normalmente no se puede recolectar semen por esta técnica en aproximadamente el 2% de los animales fértiles. La razón de este fracaso puede residir en una técnica defectuosa, equipo inadecuado o escaso descanso sexual de los animales. El uso de una hembra y una vagina artificial debe ser considerado si el macho es difícil de colectar. Animales asustados o de mal carácter, que no recibieron una adecuada estimulación por masaje rectal, o que han eyaculado varias veces en las últimas 24 horas son comúnmente difíciles para realizar esta técnica y producen muestras de baja densidad.

Como conclusión se puede afirmar que este es un método completamente antinatural, muy traumático para el animal (por la posibilidad de producirle lesiones), y que debe tratar de emplearse sólo como último recurso, como cuando no se ha podido de ninguna manera extraerle semen por medio de la vagina artificial u otros métodos.

En general, las diferencias entre el semen obtenido por electroeyaculación y aquel recolectado por el método de la vagina artificial resultan en una menor concentración espermática, menor número de espermatozoides por eyaculado, menores niveles de fructuosa y ácido cítrico y una mayor contaminación, todo esto válido para el método de la electroeyaculación.

6. MÉTODO DE LA VAGINA ARTIFICIAL

Éste es un método universalmente utilizado en la mayoría de las especies animales domésticas, aunque en el ganado bovino no es de rutina en la mayor parte de los establecimientos ganaderos sino que es casi exclusivo de los centros de inseminación artificial, ocurriendo lo mismo en los haras equinos.

Mediante esta técnica el macho que eyacula desarrolla totalmente la cadena de reflejos y la mecánica del coito fisiológico, aunque no exista penetración ni eyaculación en la vagina de una hembra.

Los machos seleccionados para la recolección de semen mediante el uso de una vagina artificial deben ser mansos, poseer bozal y ser entrenados con mocheta. El animal de monta debe estar sujeto en un brete angosto por los lados, y aquellos que no estén familiarizados con la VA pueden requerir la presencia de una hembra en celo. Como alternativa, una hembra sedada (xilacina, 0,03 mg/kg) sujeta en el brete de monta puede facilitar la colección.

Básicamente la vagina artificial es preparada llenando la camisa interna con agua lo suficientemente caliente para resultar en una temperatura final de 42-50 grados centígrados. Se puede agregar aire para incrementar la presión de la vagina. Finalmente ésta es lubricada con gel estéril no espermicida.

Tipos de vagina artificial

La primera fue construida en Rusia, hacia fines de 1931, y consistía en un cilíndrico de caucho de 60 cm de largo por 5,5 cm de diámetro. Existen actualmente diferentes modelos que, si bien responden al mismo esquema básico, muestran algunas pequeñas variaciones entre ellos:

a)Vagina de plástico transparente: La particularidad que presenta es que posee un termómetro en su interior.

b)Modelo danés: es el tipo de vagina artificial más ampliamente utilizado. Tiene diferentes partes, a saber:

Cilindro rígido de goma con agujero y tapón para el llenado con agua caliente

Camisa interior de látex

Cono recolector de látex

Ligaduras para atar

Tubo recolector de vidrio

En este modelo el tubo colector se encuentra expuesto a temperatura ambiente y a la incidencia de los rayos solares, por lo que debe ser cubierto con alguna protección térmica, como goma espuma. Mide aproximadamente 40 cm de largo y 5,7 cm de diámetro. Al cono colector de látex se le puede hacer un pequeño orificio por donde se pueda expulsar el aire en el momento de la introducción del pene a la vagina artificial, teniendo la precaución de colocar el cono con el orificio hacia arriba.

c)Modelo de Cornell: para eliminar la exposición del tubo colector a la luz y a la temperatura ambiental, Cornell ideó una vagina en la que el colector corre por dentro del revestimiento interno y de esta manera queda protegido. Contiene una vaina de goma en forma de embudo que corre a lo largo de la mayor parte de la vagina por dentro de la cubierta interna y que se conecta con el tubo recolector. Puede llegar a medir 70 cm de largo y 6,3 cm de diámetro.

d)Modelo italiano (Bonadonna): este tipo es muy semejante al modelo danés; presenta una longitud de 60 cm y 6 cm de diámetro. Como particularidad, contiene un disco de goma espuma de 1, 5 cm de grosor con una fisura en el medio que se fija en la extremidad peneana del tubo rígido. Este diafragma cumple la función de aumentar la fricción en el pene, el cual deberá entrar a la vagina con cierto esfuerzo y así desencadenar el proceso final de la eyaculación de una manera más cercana a la natural. Estos agregados evitan que el agua del interior de la vagina artificial salga fuera de los márgenes terminales del cilindro hueco.

Preparación de la vagina (Modelo danés)

El lavado de las camisas y conos de látex debe hacerse con agua caliente y detergente neutro, enjuagadas luego con el mismo agua caliente de la canilla, posteriormente con alcohol etílico 70º y finalmente con agua destilada. Se dejan secar y se guardan es estuches cerrados a los que no pueda ingresar polvo ni suciedad. El cilindro es lavado de la misma manera y esterilizado con autoclave o en su defecto por ebullición.

Para el montado, se coloca la camisa de látex dentro del cilindro. Como la primera es más larga que el tubo rígido, se revierten los extremos de la camisa sobre las extremidades del mismo. Ambos extremos son fijados con ligaduras, sin olvidar contar siempre el número de ligaduras que se emplean, principalmente en el extremo peneano, para evitar posteriores pérdidas. Luego se coloca el cono colector de látex fijándose con nuevas ataduras.

Una vez armada la vagina, se debe llenar el espacio vaginal con agua caliente a 65 – 70 grados, para lograr una temperatura interna que oscile entre 40 y 44 grados para animales jóvenes que recién comienzan su período de extracción, y entre 45 y 52 grados para los adultos ya entrenados. El agua se ha de colocar primero con la vagina en posición horizontal hasta que rebalse, y luego en forma vertical desalojando el excedente. De esta manera, la presión intravaginal será la correcta en el momento de la introducción del pene en la vagina, aunque debe recordarse que esta presión depende mucho del tamaño del órgano. Se debe confirmar la temperatura del agua colocando un termómetro en el interior de la vagina artificial, tocando con éste la camisa de látex.

Una vez llena de agua, se coloca el tubo colector de vidrio cubierto luego por goma espuma y de esta manera ya se encuentra preparada para ser utilizada. Antes de comenzar la extracción puede lubricarse la entrada con vaselina sólida esterilizada, o bien con una goma especial preparada de la siguiente manera: diluir goma tragacanto (3 gramos), en 5 centímetros cúbicos de glicerina, y colocar todo en 50 centímetros cúbicos de agua destilada.

Antes de la recolección el animal debe estar bien limpio para evitar la contaminación de la muestra. Se deben cortar los pelos del orificio prepucial y de la periferia del mismo. Es conveniente el completo lavado de la zona aproximadamente una hora antes de la extracción, como así también la irrigación del saco prepucial con solución fisiológica tibia una vez por semana, pero nunca el mismo día, ya que podría ocurrir una mezcla entre el semen y los líquidos prepuciales.

En algunos Centro de Inseminación Artificial de bovinos el día anterior a la extracción de semen se realiza una ducha completa del reproductor; esta práctica persigue dos objetivos distintos, por un lado la higiene, y por el otro la creación en el animal de un reflejo condicionado.

Es importante recordar que para cada animal debe emplearse una vagina artificial diferente, respetando normas sanitarias básicas para evitar la diseminación de enfermedades infecciosas, principalmente las de tipo venéreas o de transmisión sexual.

Técnicas de extracción

Como ya se mencionó anteriormente, el método de la vagina artificial tiene como principal desventaja de requerir el uso de animales dóciles y entrenados, junto con un súcubo adecuado. Sin embargo, la universalidad del uso de esta técnica responde al hecho de que se obtienen eyaculados muy limpios, con una baja contaminación cuando se realiza correctamente y con un equipamiento base de muy bajo costo, amén de observar toda la cadena de reflejos de excitación y líbido sexual.

Así como existen diferentes tipos de vaginas artificiales, ocurre lo mismo con respecto a las técnicas de extracción, por lo que podríamos clasificarlas de la siguiente manera:

1)Según el súcubo utilizado

Con maniquí fijo: existen diferentes modelos de éstos. En general, consisten en una estructura de acero muy fuerte o de madera con un acolchado para amortiguar golpes que podría recibir el animal. Se encuentran cubiertos de cuero bovino o una tela especial. El interior está vacío, y en la parte posterior se coloca la vagina. Este sistema es considerado el más próximo a lo fisiológico.

Con maniquí móvil: este aparato posee la ventaja de facilitar el desplazamiento del reproductor e ir cambiando el método de recolección (muy útil para el caso de animales de baja líbido). Existen modelos que se desplazan empujando y otros que poseen un motor eléctrico que se encuentra en el interior del maniquí y que es accionado por el operador.

c) Con animal vivo: para esto se puede utilizar un potro triangular para la contención del animal que sirve de maniquí. No se debe emplear piso duro, ya que es muy traumático para las articulaciones del reproductor. En algunos casos se coloca arena para amortiguar el salto, pero de cualquier manera el piso más apropiado es el de tierra.

Los animales que suelen emplearse son hembras (vacas o yeguas, según el caso), o en centros de inseminación artificial de bovinos es común el uso de novillos o toros viejos. En el caso de utilizarse hembras, es conveniente que no estén en celo, y que estén perfectamente sanas y sean de temperamento tranquilo. El uso de vacas lecheras del establecimiento es una gran ventaja ya que son animales que están acostumbrados a estar atados. La cola debe atarse a uno de los miembros posteriores, o bien entre los mismos dirigidos hacia delante y atada en el cuello con una soga fina.

2) Según la forma de presentar la VA

Fija: esta técnica se emplea cuando se utiliza un súcubo que permite colocar la vagina artificial dentro del mismo.

Manual: este es el método preferido universalmente. El operador se sitúa del lado derecho del animal o maniquí. Con la mano derecha sostiene la vagina artificial, trabándola con el tapón de goma. Cuando el macho inicia el salto, con la mano izquierda enguantada se desvía la dirección del pene (tocando solamente el prepucio) y se lo dirige hacia la vagina, la cual debe presentar una dirección de arriba-abajo en un ángulo de 45º. Es conveniente apoyar el hombro izquierdo sobre el reproductor, para ser desplazado junto con él en caso de que éste corrija su posición. De esta manera, la recolección se consigue en forma rápida y precisa.

Una vez que el macho realiza la estocada se debe acompañar al pene y dejar la vagina el tiempo suficiente para poder recolectar los últimos residuos del contenido uretral, incluso si el animal ya ha descendido totalmente del súcubo. Este método brinda mayor volumen de semen y un número de espermatozoides superior que el método de retiro inmediato de la vagina luego de la estocada.

El operador debe estar atento en todo momento durante el desarrollo de la técnica, ya que empuje es extremadamente vigoroso y un colector desprevenido puede perder el equilibrio, caérsele la vagina de sus manos o provocar lesiones sobre el pene del animal.

Por último, vale la pena recordar que cada individuo presenta características individuales que es conveniente conocer a fin de lograr la máxima eficiencia en las recolecciones. Si el operador se resiste a conocer y aceptar esos “caprichos” particulares muchas veces se llega al fracaso en la obtención de resultados.